0: Добрый день, меня зовут Ветошкина Дарья, я кандидат биологических наук. И сегодня мы будем обсуждать практикум по задаче тонкослойная хроматография. С помощью тонкослойной хроматографии. Мы будем разделять пигменты зелёного листа на

1: В данный момент уже хорошо известно, каким образом они разделяются и какие пигменты содержатся в зелёных листьях высших растений. Соответственно, эти пигменты, эти полосы, которые мы получим, можно использовать в качестве контроля для того, чтобы исследовать образцы с условно.

2: Известным содержанием пигмента в нашей работе в качестве таких условно Неизвестных Образцов мы будем использовать цедру апельсина, грейпфрута и pamela, и мы можем перейти к работе 1 этапом будет заполнение хроматографии.

3: Камеры. Заранее мы приготовили смесь подвижной фазы, которую сейчас будем переливать в камеру для хроматографирования. Делается это заранее самым 1 этапом нашей задачи для того, чтобы в камере произошло насыщение парами в качестве

4: Подвижной фазы в тонкослойной хроматографии выступают легколетучие органические растворители как только мы их перельём в камеру, они начнут испаряться и насыщать камеру парами.

5: Все работы с подвижной фазой проходят только под вытяжкой, потому что подвижная фаза легко летучие растворители, более того, сама камера герметична между крышкой и камерой, все промазано маслом для того, чтобы подвижная фаза не могла испаряться и перед началом работ.

6: Мы включаем вытяжную

7: Таким образом, мы получили экстракт. Экстракт мы переливали из чашки просто через край, поэтому туда вместе, собственно, экстрактом попали ещё частички нерастворенных веществ, которые мы добавляли. Частички ткани.

8: Все эти кусочки, они нам помешают при нанесении на пластинку, так как могут повредить неподвижную фазу. И поэтому мы будем их удалять. Для этого будем использовать центрифугу, так как образец у нас только 1 для уравновешивания мы

9: Будем использовать *** с водой важно, что в центрифуге образцы должны располагаться чётко напротив друг друга для того, чтобы центрифуга была уравновешена.

10: После центрифугирования образовался плотный осадок.

11: Всю надосадочную жидкость мы будем переносить в чистый пендор и использовать для нанесения на пластинку и последующего разделения.

12: Для разделения мы будем использовать пластинки, на поверхность которых нанесён силикогель неподвижной фазой будет выступать силикогель наши пластинки размером 5 на 10 сантиметров этого вполне достаточно для разделения пигментов зелёного листа.

13: Предварительно пластинки мы будем размечать, будем отмечать на них линию старта, линию финиша и точки нанесения Образцов. Всего 3 точки для нанесения образца. Образец мы будем наносить с помощью микрокапилляра. Это стеклянная трубка, которая позволяет набирать

14: Объёмы до 5 микролитров. Почему мы используем стеклянные капилляры, не можем использовать автоматические пипетки, потому что органические растворители, с которыми мы работаем, они очень активны, в том числе в отношении пластика, поэтому

15: Могут быть использованы только стеклянные капилляры для нанесения жидкости будет использоваться шприц, капилляр соединяется со шприцом с помощью силиконовой трубки.

16: И дальше, поднимая поршень, мы набираем жидкость в капилляр и скалываем на пластинку.

17: Во 2 части задачи мы будем проводить исследование пигментов и других веществ, содержащихся в цедре различных цитрусовых. Мы будем использовать помело, апельсины, грейпфрут. Каждый из них мы будем растирать в отдельной ступке, будем получать

18: Отдельные экстракты делать будем Ровно тоже самое, что делали в 1 части задачи.

19: После завершения разделения пигментов на отдельные полосы мы переходим к последнему этапу работы. Это анализ полученных результатов. Для того, чтобы определить, какие пигменты содержатся в образце. Можно использовать несколько подходов в случае

20: С пигментами зелёного листа все довольно легко, так как пигменты окрашены, их сразу видно после разделения, и мы можем определить рф это параметр, который позволяет нам качественно определить, какое вещество содержится.

21: В той или иной полосе в случае с пигментами веществами, содержащимися в цитрусовых, все не так просто, не все они окрашены. Когда мы смотрим на пластинку, мы видим довольно мало полос, однако мы можем использовать

22: Такой метод визуализации как ультрафиолет, мы можем посмотреть на пластинку под действием ультрафиолета и тогда мы видим дополнительные полосы.

23: Когда мы смотрим на эти пластинки, то мы можем заметить интересный факт известно, что грейпфрут является диким гибридом помело и апельсина грейпфрут абсолютно случайно получился при смешении этих 2 видов.

24: Это хорошо видно. По веществам, которые содержатся в грейпфруте. Наибольшее количество полос мы видим именно в грейпфруте. Нижняя часть это полосы из апельсина и верхняя часть это полосы из помела.

25: Спасибо за внимание. Надеюсь, вам было интересно и по